| 作为一个生物相关专业的学生：一些搞不懂的生物学常识7 | 您所在的位置：网站首页 › westernblot marker显影 › 作为一个生物相关专业的学生：一些搞不懂的生物学常识7 |
|
作为一个生物相关专业的学生：一些搞不懂的生物学常识7 western blot 是什么意思Western blot（又称为蛋白质印迹）是一种常用于检测蛋白质的方法。它是通过电泳将蛋白质分离并转移到固体支持物上，然后使用特定的抗体检测特定的蛋白质。这些抗体会与目标蛋白质结合，形成特定的蛋白质-抗体复合物，最后通过化学方法显示出来。Western blot广泛用于生物医学研究中，例如研究蛋白质表达、蛋白质相互作用等。western blot的详细步骤流程Western blot 是一种用于检测蛋白质的方法，可以用于研究蛋白质的表达量和分子量等。下面是 Western blot 的详细步骤流程： 组织或细胞裂解：将需要检测的样品（通常是组织或细胞）裂解，将蛋白质释放到裂解液中。裂解液可以用 RIPA 缓冲液等常用的裂解液，其中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂和表观遗传学调控剂等。蛋白质定量：使用比色法或荧光法等方法对裂解液中的蛋白质含量进行定量。SDS-PAGE 分离：将定量后的样品加入 SDS-PAGE 缓冲液中，经过电泳分离蛋白质。在 SDS-PAGE 缓冲液中，SDS 可以使蛋白质变成带有负电荷的线性链状结构，从而使所有蛋白质带有相同的电荷密度。通过电泳分离可以将蛋白质按照分子量大小分离出来。蛋白质转移：将 SDS-PAGE 胶板上的蛋白质转移到 PVDF 膜或 NC 膜等转移膜上。转移膜需经过激活和平衡处理，通常使用传输缓冲液。阻断非特异性结合：用牛血清白蛋白（BSA）、非脂干奶粉或其他蛋白质阻断膜表面的非特异性结合位点，减少蛋白质与膜表面的非特异性结合，提高抗体特异性。抗体孵育：将目标蛋白对应的一抗或二抗孵育在转移膜上，使其与膜上的蛋白质结合。一抗通常是针对目标蛋白的特异性抗体，而二抗则是与一抗特异性结合的抗体。二次抗体孵育：如果使用的是一抗，则需要使用与一抗特异性结合的二抗。二次抗体一般是与一抗来源的物种不同的抗体，通常是羊或兔抗体，其中含有与一抗特异性结合的荧光素或酶标记物。信号检测：通过荧光素或酶标记物的反应来检测蛋白质。荧光素标记的二抗可以通过荧光显微镜来检测，而酶标记物通常使用显色剂如TMB或者BCIP/NBT来检测。这些显色剂会和酶标记的二抗反应，形成可以被观察到的颜色。数据分析：使用成像仪或相机拍摄转移膜，并使用图像分析软件分析转移膜上的蛋白质带，包括定量分析、蛋白质的相对含量和分子量的测定等。总的来说，Western blot 是一种经典的蛋白质检测方法，但其实验步骤繁琐且操作要求较高，需要专业的实验技能和仪器设备。 如果实验室比较穷的话，裂解液、蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂和表观遗传学调控剂等该如何配制？裂解液一般的裂解液可以包括以下成分：Tris-HCl缓冲液、NaCl、Tween-20或 Triton X-100等非离子表面活性剂、EDTA或者 EGTA等螯合剂、蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂等。具体的配方可以根据需要进行调整，常见的配方如下：RIPA缓冲液：50 mM Tris-HCl (pH 7.4)、150 mM NaCl、1% Nonidet P-40、0.5% sodium deoxycholate、0.1% SDS、1 mM EDTA、1 mM PMSF、10 µg/ml aprotinin、10 µg/ml leupeptin、1 mM Na3VO4、1 mM NaF。NP-40缓冲液：50 mM Tris-HCl (pH 7.4)、150 mM NaCl、1% Nonidet P-40、1 mM EDTA、1 mM PMSF、10 µg/ml aprotinin、10 µg/ml leupeptin。RIPA-B缓冲液：50 mM Tris-HCl (pH 7.4)、150 mM NaCl、1% Nonidet P-40、0.5% sodium deoxycholate、0.1% SDS、1 mM EDTA、1 mM PMSF、10 µg/ml aprotinin、10 µg/ml leupeptin、1 mM Na3VO4、50 mM β- glycerophosphate。蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂常用的蛋白酶抑制剂有PMSF、aprotinin和leupeptin等，磷酸酶抑制剂有NaF和Na3VO4等。这些抑制剂可以购买相应的制剂，也可以自己制备。下面是一些简单的制备方法：PMSF：用100 mM甲醇溶解PMSF，最好现用现配。Aprotinin和leupeptin：用水溶解1 mg/ml，最好现用现配。NaF和Na3VO4：用水溶解100 mM，最好现用现配。表观遗传学调控剂常用的表观遗传学调控剂有HDAC抑制剂、DNA甲基转移酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂等。这些抑制剂可以购买相应的制剂，也可以根据需要自行配制。下面是一些常用的配方：TSA (Trichostatin A)：用DMSO溶解1 mM的TSA，最好现用现配。SAHA (Vorinostat)：用DMSO溶解10 mM的SAHA，最好现用现配。5-Aza-2'-deoxycytidine (5-Aza)：用PBS或者DMEM等培养基溶解1 mM的5-Aza，最好现用现配。需要注意的是，自行配制的裂解液、抑制剂和调控剂可能存在不稳定性和变异性，因此在实验过程中需要做好质量控制和标准化。同时，也需要根据不同实验的需要进行调整和优化。以上的试剂有哪些试剂商可以提供，并列出名字，以及价格具体的试剂提供商和价格会随时间和地点的变化而有所不同，以下是一些常见的试剂提供商和参考价格供您参考：Trichostatin A (TSA)提供商：MedChemExpress (MCE)价格：约人民币1000元/10mgVorinostat (SAHA)提供商：MedChemExpress (MCE)价格：约人民币1000元/10mg5-Aza-2'-deoxycytidine (5-Aza)提供商：MedChemExpress (MCE)价格：约人民币800元/10mg蛋白酶抑制剂混合液提供商：Sigma-Aldrich价格：约人民币800元/1ml磷酸酶抑制剂混合液提供商：Sigma-Aldrich价格：约人民币800元/1ml需要注意的是，以上价格仅供参考，实际价格会根据供应商、数量、质量等因素而有所不同，购买前最好向供应商查询实时价格和订购方式。另外，还可以选择国内的试剂供应商，如阿拉丁、齐家网等进行采购。以下是一些在中国常见的试剂供应商：华东地区：阿拉丁（Aladdin）、金纬泰（Genetimes Technology）、迈科生物（MyBioSource）、高斯贝尔（Cowin Biosciences）、芯片世界（ChipScreen Biosciences）等。华南地区：亿纳生物（Invitrogen）、欣博盛（Selleck）、英孚生物（InnoLife）、生济生物（Sino Biological）、克莱因（Cayman Chemical）等。华北地区：百奥赛思（BioSs Antibodies）、昊天生物（Proteintech）、禾望生物（Vazyme Biotech）、梅森生物（Mason Biolab）等。需要注意的是，不同的供应商提供的产品质量和服务水平会有所不同，选择合适的供应商需要根据实际情况进行评估和选择。蛋白质印迹是什么意思？蛋白质印迹（Western blot）是一种用于检测蛋白质的分析方法，也叫蛋白质免疫印迹（protein immunoblotting）。该技术通过电泳将蛋白质分离，然后转移到固体支持物上，例如聚丙烯酰胺凝胶或聚乙烯二醇膜上。然后，用特定的抗体与目标蛋白质结合，最后通过染色或放射自显影等方法检测蛋白质。蛋白质印迹常用于研究蛋白质的表达、定量、结构、功能以及相互作用等。该技术可以检测蛋白质的种类、大小和相对含量，对于生物医学研究和临床诊断都具有重要意义。电泳为什么可以将蛋白质分离？电泳是利用电场将带电粒子（例如蛋白质、DNA等）在凝胶或液体介质中向电极运动的方法。在电场作用下，带电蛋白质会向着带相反电荷的电极方向移动。由于不同蛋白质的电荷和分子量不同，所以在电泳过程中，不同大小和电荷的蛋白质会分别在凝胶中移动不同的距离，从而实现分离。具体来说，电泳分离蛋白质的原理是，将样品中的蛋白质在凝胶中移动时，由于蛋白质的分子量和电荷不同，它们会在电场作用下向不同方向移动，并最终在凝胶中形成不同的带。这些带可以通过特定的染色方法或特异性抗体的检测方法来鉴定和识别不同的蛋白质。因此，电泳是一种有效的蛋白质分离方法，常被用于生物医学研究和临床诊断中，例如蛋白质表达、纯化、鉴定和定量等。WB中所有的蛋白质不是经过处理后带的电量是相等的吗？在Western blot实验中，样品中的蛋白质在电泳过程中会被分离成不同的带，这些带的大小和相对含量通常与蛋白质的分子量和电荷有关。在电泳过程中，样品中的蛋白质通常会经过处理，例如加入还原剂、热变性或磷酸化等，以改变它们的电荷性质，从而更好地分离和检测。然而，处理后的蛋白质带的电量并不是绝对相等的。这是因为不同的蛋白质在电泳中的运动速度受多种因素影响，例如蛋白质分子量、电荷、凝胶浓度和 pH 值等。此外，蛋白质的结构和组成也可能影响其电泳行为。因此，即使处理过后，不同蛋白质带的电量也可能不完全相等。需要注意的是，Western blot实验中，可以在同一凝胶中运行多个处理样品，以便在同一实验中直接比较它们之间的差异。在这种情况下，需要保证不同样品之间的处理方式、负载量和电泳条件等是一致的，以尽量减小实验误差。详细解说一下还原剂、热变性或磷酸化等？在 Western blot 实验中，还原剂、热变性和磷酸化等处理方法常用于改变蛋白质的电荷性质，从而更好地进行电泳分离和检测。下面是这些处理方法的详细解释：还原剂处理：还原剂是指能够还原二硫键的化合物，例如二甲基亚砜（DMSO）和β-巯基乙醇（β-ME）等。在蛋白质分子中，二硫键是一种稳定的化学键，它们连接了两个半胱氨酸残基。通过加入还原剂，可以破坏蛋白质分子中的二硫键，使其变得更易于电泳分离和检测。热变性处理：热变性是指在高温条件下，蛋白质分子会发生结构性变化，从而影响其电荷性质。在 Western blot 实验中，常常用高温处理的方法来改变蛋白质的电荷性质。一般情况下，在蛋白质分离前，将样品加热至95-100摄氏度，通常加热时间为5-10分钟。这样可以使蛋白质分子部分变性，降低其电荷密度，从而更易于电泳分离和检测。磷酸化处理：磷酸化是指将磷酸基引入蛋白质分子中的一种化学修饰方式。在 Western blot 实验中，可以使用磷酸化酶或磷酸化酸化剂对蛋白质进行磷酸化处理。磷酸基的引入会改变蛋白质分子的电荷性质，使其带有更多的负电荷，从而更易于电泳分离和检测。需要注意的是，处理方法的选择应该根据具体的实验目的和样品性质进行，不同的处理方法可能会对蛋白质分子的结构和功能产生不同的影响，因此需要根据实验的要求进行选择。此外，不同的处理方法也可能会影响Western blot实验的结果和解释。蛋白质定量的详细步骤是怎样的？蛋白质定量通常分为分光光度法、BCA法、Lowry法、Bradford法等几种方法，下面是一种常见的BCA法的详细步骤：样品制备：将待测蛋白质样品加入适量的去离子水或缓冲液中，使其浓度适当，通常建议浓度在1-5 mg/mL之间。样品检测：取一定量的蛋白质样品（一般为2-20 μL），加入等体积的BCA试剂（含有Cu2+和其他试剂），混匀后孵育在37°C的恒温水浴中15-30分钟。分析检测：将反应产生的紫色蛋白质-铜络合物的吸收值，以比色计或分光光度计测量在560 nm波长下的吸光度（OD），然后与标准曲线相比较，计算出样品中蛋白质的浓度。评估结果：根据实验需要，评估蛋白质样品的浓度和纯度，可以通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）等方法进行进一步的检测和分析。需要注意的是，在进行蛋白质定量时，应根据不同的试剂和仪器选择合适的比色计或分光光度计，并制备一定浓度的蛋白质标准曲线，以确保测量结果的准确性和可靠性。BCA试剂是如何配制的？BCA试剂是一种含有Cu2+、Bicinchoninic acid和其他试剂的复合试剂，常用于蛋白质定量的分析。以下是BCA试剂的配制方法：BCA试剂A液的配制：将4%硫酸铜溶液和50 mM NaOH溶液按照比例混合，得到的混合液称为试剂A液。BCA试剂B液的配制：将0.04 g Bicinchoninic acid粉末溶解在25 mL 0.1 M NaOH中，再加入0.95 g NaHCO3和9.6 g Na2CO3，最后加入50 mL去离子水，调整pH至8.5左右，得到的混合液称为试剂B液。BCA试剂C液的配制：将0.1 g CuSO4·5H2O和0.004 g EDTA·2Na溶解在50 mL去离子水中，调整pH至4.2左右，得到的混合液称为试剂C液。最终BCA试剂的配制：将试剂A液和试剂B液按照50：1的比例混合，然后加入试剂C液，按照50：1：1（A液：B液：C液）的比例混合，最终得到的混合液即为BCA试剂。需要注意的是，BCA试剂配制时需要注意试剂中各种化学试剂的浓度和pH值，以保证试剂的稳定性和准确性。另外，配制好的BCA试剂应该保存在阴凉干燥的地方，并在保证试剂质量的情况下尽快使用。如何在Excel中建立标准曲线，分析蛋白浓度？在Excel中建立标准曲线，分析蛋白浓度的步骤如下：准备标准品根据实验需要，准备一系列不同浓度的标准品。可以使用已知浓度的蛋白质标准品，或者将一定浓度的蛋白质溶液进行稀释，制备不同浓度的标准品。以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，在Excel中建立散点图。将标准品的吸光度与浓度信息输入Excel中，选中数据，然后在“插入”菜单中选择“散点图”，选择“散点图样式”，完成建立散点图的步骤。添加趋势线选中散点图上的任一数据点，右键选择“添加趋势线”，在“趋势线选项”中，选择线性趋势线，勾选“显示方程式”和“显示R方值”，确定后即可在图表上显示线性趋势线和相关方程式。计算未知样品的浓度根据获得的标准曲线方程式，输入未知样品的吸光度值，即可自动计算出未知样品的浓度。需要注意的是，在建立标准曲线时，需要准确记录吸光度值、标准品浓度和对应的蛋白质浓度信息，以保证标准曲线的准确性和可重复性。同时，建议使用多个浓度的标准品制备标准曲线，以获得更加准确的浓度计算结果。R方值有什么要求？R方值是衡量线性回归模型拟合优度的一种指标，其取值范围为0到1。R方值越接近1，说明线性回归模型对数据的拟合越好；R方值越接近0，则说明线性回归模型对数据的拟合越差。在建立标准曲线时，R方值的要求主要取决于实验的具体要求和数据的分析需求。通常来说，R方值应该大于0.95，这意味着线性回归模型可以很好地解释数据的变异。但是，对于不同实验和数据的特点，实际的R方值要求也会有所不同。需要注意的是，R方值只能衡量线性回归模型对数据的拟合优度，不能代表数据的准确性或者说实验的准确性。因此，在使用R方值来评估实验数据时，还需要结合其他指标和实验设计等多方面因素进行综合分析。如何收取组织或细胞中的蛋白质，详细步骤？收取组织或细胞中的蛋白质，一般需要经过以下步骤：裂解细胞或组织：将细胞或组织裂解，释放出细胞内的蛋白质。裂解方法可以使用多种方式，包括机械破碎、超声波、冻融法、化学法等。一般来说，裂解缓冲液中需要添加还原剂和蛋白酶抑制剂等试剂，以保护蛋白质不被氧化和降解。清除细胞碎片：使用超高速离心等方法，清除细胞碎片和细胞核等非蛋白质成分，以避免对蛋白质的干扰。蛋白质定量：使用BCA或其他方法定量蛋白质的含量。蛋白质处理：如需进行Western blot或其他蛋白质分析实验，需要根据实验需要进行蛋白质处理，如还原、热变性、磷酸化等。蛋白质分离：使用SDS-PAGE等方法对蛋白质进行分离。总之，收取组织或细胞中的蛋白质需要经过多个步骤，具体的实验方案需要根据实验目的和要求来设计。收取细胞或者组织有什么要求吗，为收取细胞或组织中的蛋白？收取细胞或组织中的蛋白质需要注意以下几个方面：样品的保存：样品的保存需要在低温下进行，可以将样品冷冻在-80℃的冰箱中保存，或加入液氮中进行冷冻保存。样品的裂解：在裂解细胞或组织时，需要注意使用适当的缓冲液，含有必要的还原剂、蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂等试剂。这些试剂可以保护蛋白质不被氧化和降解，从而获得更好的蛋白质样品。蛋白质的纯度：蛋白质的纯度对于后续的实验结果至关重要。因此，在提取蛋白质时，需要尽量避免污染和干扰。如有需要，可以进行纯化步骤，例如亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等。蛋白质的稳定性：在提取蛋白质后，需要立即进行保护和处理，如避免暴露在空气中，立即加入蛋白酶抑制剂等处理，以保持蛋白质的稳定性。总之，为了获得高质量的蛋白质样品，需要在样品保存、裂解、纯化和稳定性等方面严格控制，以提高样品的质量和稳定性。为了在后续中做western blot，如何处理细胞或组织？Western blot是一种检测蛋白质表达的方法，需要使用裂解细胞或组织的方法来提取蛋白质。下面是一般的细胞或组织处理步骤：细胞或组织的裂解：将细胞或组织裂解以获得蛋白质。可以使用不同的裂解缓冲液，包括含有表面活性剂（如三十烷基磷酸钠或十二烷基硫酸钠）或非离子型表面活性剂（如Tween-20）的缓冲液，加入蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂、还原剂等辅助剂，有时需要使用机械方法（如超声波处理）来彻底裂解细胞。蛋白质的定量：使用BCA、Bradford等方法对蛋白质进行定量。蛋白质的电泳：使用SDS-PAGE电泳将蛋白质分离并定量。在电泳过程中，可以使用蛋白标记物来估计蛋白质的分子量。蛋白质转印：使用电泳转印技术将电泳分离的蛋白质转移到聚丙烯膜或硝酸纤维素膜上。阻断：在Western blot中，需要使用阻断缓冲液（如5%的脱脂奶粉、3%的BSA等）封闭非特异性结合位点，减少假阳性信号。抗体结合：使用特异性抗体结合目标蛋白质。信号检测：使用辅助试剂（如HRP标记的二抗、发光底物等）来检测目标蛋白质。总之，在Western blot前的细胞或组织处理过程中，需要注意样品的保存、裂解、定量、电泳、转印、阻断、抗体结合和信号检测等方面的细节和注意事项，以确保获得准确和可靠的实验结果。为了在后续中做western blot，如何处理培养皿中的细胞或组织？在培养皿中处理细胞或组织的步骤通常如下：收集细胞或组织：用PBS等生理盐水冲洗培养皿中的细胞或组织，用细胞刮刀或吸头收集至离心管中。细胞或组织的裂解：用适当的细胞裂解液（如RIPA）或蛋白酶抑制剂（如PMSF）溶解细胞或组织，使细胞或组织完全裂解并释放蛋白质。需要注意的是，细胞裂解液的成分应该根据实验目的进行调整。蛋白质的定量：使用BCA或其他蛋白质定量试剂盒对裂解液中的蛋白质进行定量，以确定蛋白质的浓度。蛋白质的保存：将裂解液分装至适当的离心管中，标注样品名称和浓度，并在-80℃冷冻保存。以上步骤需要根据实验目的和具体实验要求进行调整。例如，对于某些蛋白质，需要在裂解液中加入磷酸酶抑制剂或其他保护剂以避免蛋白质降解。同时，不同的细胞或组织需要采用不同的裂解液和不同的裂解方法以确保蛋白质的完全裂解。可以使用胰酶消化细胞吗？如果后续是做WB？一般情况下，使用胰酶可以有效地消化细胞，并释放大量蛋白质。但是，如果您计划后续进行Western Blot实验，建议使用其他细胞裂解液进行裂解，因为胰酶在裂解过程中会降解某些蛋白质，从而可能导致您需要检测的蛋白质在样品中丢失或降解。此外，不同种类的细胞对胰酶的敏感性不同，可能需要根据细胞类型选择不同的裂解液。对于Western Blot实验，一般建议使用含有磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和还原剂等的裂解液进行细胞裂解，以最大限度地保护蛋白质的完整性和稳定性。同时，不同种类的蛋白质可能需要不同的裂解条件，您可能需要根据需要调整裂解液的成分和裂解时间，以获得最佳的裂解效果。如何判断哪些情况下可以使用胰酶消化细胞呢？哪些情况下不可以呢？如果后续是做WB？一般来说，使用胰酶消化细胞通常适用于细胞外膜较坚硬或粘附性较强的细胞，例如成纤维细胞或上皮细胞等。但是，对于某些细胞，例如神经细胞和淋巴细胞等，它们的细胞外膜较柔软，使用胰酶等消化酶时可能会导致蛋白质分解，降低后续实验的灵敏度和可靠性。因此，在选择细胞裂解方法时，需要根据不同细胞类型的特点进行评估。如果后续是进行Western Blot实验，则更建议使用其他细胞裂解液进行细胞裂解。使用含有蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂和还原剂等成分的细胞裂解液能够更好地保护蛋白质完整性，减少其分解或失活的可能性。同时，对于一些难以裂解的细胞，例如胶原质等细胞外基质含量高的细胞，也可以尝试使用其他特殊的细胞裂解液进行裂解。总之，在选择细胞裂解方法时，需要考虑细胞类型、实验目的、样品数量和实验要求等多个因素，以选择最适合的方法，从而保证实验结果的准确性和可靠性。如果是胞内的蛋白质也会降解吗？是的，细胞内的蛋白质也会降解。细胞内的蛋白质主要通过两个途径进行降解：一是通过泛素-蛋白酶体途径进行降解，二是通过溶酶体-内质网途径进行降解。泛素-蛋白酶体途径主要降解细胞内的可折叠的蛋白质，而溶酶体-内质网途径主要降解细胞内的非可折叠蛋白质、膜蛋白和一些外源性蛋白质。因此，在收取胞内蛋白质时，需要加入蛋白酶抑制剂等保护剂来防止蛋白质的降解。如果是胰酶消化细胞的话，会导致细胞内的蛋白质降解吗？胰酶是一种消化酶，可以水解多肽和蛋白质，因此使用胰酶消化细胞会导致部分蛋白质的降解。在消化细胞的过程中，胰酶可以通过水解胞内膜上的受体和胞内信号通路蛋白质等而导致它们的失活和降解，同时还可能引发自身的蛋白质降解。因此，在收取蛋白质时，如果需要保留细胞内蛋白质，最好不要使用胰酶消化细胞，而是选择其他方式如冻融法或超声波法等来收取蛋白质。如果必须使用胰酶消化细胞，则需要选择适当的消化时间和浓度，并在消化过程中加入蛋白酶抑制剂等保护剂来减少蛋白质的降解。过表达的蛋白的细胞可以使用胰酶消化吗，主要表达在胞内？后续做WB？过表达的蛋白的细胞也可以使用胰酶消化，但是需要注意以下几点：选择合适的胰酶浓度和消化时间，避免过度消化导致蛋白质降解。在收集细胞前，需要停止蛋白质合成，否则会导致胞内蛋白质含量不稳定，影响结果。要注意胞内和胞外蛋白质的分离，避免污染和混淆。在后续的Western blot实验中，需要针对过表达蛋白设计合适的实验方案和抗体，以确保检测到目标蛋白。总的来说，胰酶消化细胞对于后续的Western blot实验是可行的，但需要针对具体情况进行调整和优化。如果实验室比较穷的话， SDS-PAGE 缓冲液该怎么配制？SDS-PAGE缓冲液是用于准备聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液，其中包含三种缓冲液：Tris-Cl缓冲液、SDS缓冲液和甘氨酸缓冲液。这些试剂都可以通过购买粉末的方式来节约成本。下面是SDS-PAGE缓冲液的配制方法：Tris-Cl缓冲液配制：将Tris粉末按照所需浓度加入去离子水中，调节pH至所需值。例如，10倍浓度的Tris-Cl缓冲液配制方法为：加入3.0 g Tris粉末到90 mL 去离子水中，pH值调节至8.8，最终体积为100 mL。SDS缓冲液配制：将SDS粉末按照所需浓度加入去离子水中，加热至SDS溶解，最终浓度通常为10%。例如，10倍浓度的SDS缓冲液配制方法为：加入1.0 g SDS粉末到90 mL 去离子水中，加热至SDS溶解，最终体积为100 mL。甘氨酸缓冲液配制：将甘氨酸粉末按照所需浓度加入去离子水中，调节pH至所需值。例如，10倍浓度的甘氨酸缓冲液配制方法为：加入3.0 g 甘氨酸粉末到90 mL 去离子水中，pH值调节至6.8，最终体积为100 mL。将以上三种缓冲液按照需要的比例混合即可。例如，10倍浓度的SDS-PAGE缓冲液配制方法为：混合10 mL 10倍浓度的Tris-Cl缓冲液、10 mL 10倍浓度的SDS缓冲液和10 mL 10倍浓度的甘氨酸缓冲液，加入去离子水至总体积100 mL。需要注意的是，在配制SDS-PAGE缓冲液时，最好使用去离子水，以避免离子对电泳的影响。另外，Tris缓冲液的pH值应该根据所使用的蛋白质试样的等电点来确定。如果实验室比较穷的话，转移缓冲液该怎么配制？如果实验室预算有限，可以尝试自制转移缓冲液，以下是一种简单的配方：3 g Tris14.4 g Glycine200 mL Methanol800 mL Water将Tris和Glycine加入800 mL的去离子水中，搅拌至完全溶解。加入200 mL甲醇并充分混合。最终体积调至1 L，过滤去除悬浮物即可使用。需要注意的是，自制转移缓冲液可能会影响实验结果，而且相对于商业缓冲液，自制的稳定性和一致性也可能会有所下降。因此，在实验条件允许的情况下，最好使用商业缓冲液。如果实验室比较穷的话，牛血清白蛋白（BSA）或者脱脂乳该怎么配制？如果实验室比较穷，可以考虑用低成本的食品级牛乳代替BSA或者脱脂乳。以下是一些简单的配制方法：用低脂牛奶代替脱脂乳：将低脂牛奶加热至80-90°C，持续5-10分钟，冷却后离心去除脂肪即可。用全脂牛奶代替BSA：将全脂牛奶加热至80-90°C，持续5-10分钟，离心去除脂肪后，再加入少量的正己烷，离心去除浮沫即可得到牛血清。需要注意的是，使用食品级牛乳代替BSA或者脱脂乳时，可能会出现一些非特异性的背景信号，因此建议在实验设计时进行一定的对照组设置和优化，以保证实验结果的可靠性。BSA和脱脂乳的区别是什么？BSA（Bovine Serum Albumin）和脱脂乳（skimmed milk）都是常用的蛋白质阻滞剂，用于在Western blot等实验中防止非特异性结合和减少背景信号。BSA是从牛血清中提取的一种蛋白质，具有单一的成分和较好的稳定性，在很多实验中可以取代其他蛋白质阻滞剂，例如脱脂乳。BSA在Western blot中的主要作用是占据膜表面的空位，防止非特异性结合，同时不会与标记的抗体产生交叉反应。BSA的优点是其纯度高，质量稳定，不含其他污染物。脱脂乳是指经过脱脂处理的牛乳，通常用于制作牛奶粉或酸奶等乳制品。在实验中，脱脂乳常用于制备阻滞液，其作用与BSA类似。脱脂乳中含有多种蛋白质、脂肪、糖类和矿物质等成分，这些成分可能会引入非特异性结合或背景信号。此外，不同的脱脂乳来源和品牌之间的差异也可能会影响实验结果的稳定性和可重复性。相比之下，BSA作为一种单一的蛋白质，其成分和质量更加稳定，更适合在一些需要高精度实验中使用。如果实验室比较穷，抗体该怎么选？抗体孵育时间该怎么设置？抗体该如何使用可以用的比较久？可以使用多少次？如果实验室预算有限，建议选择经过验证的抗体，并尽量避免购买便宜但不经过充分验证的抗体。可以通过查阅相关文献、参考其他实验室的经验或者询问供应商提供更多的信息来选择抗体。抗体孵育时间需要根据实验的具体设计和抗体的性质来决定。一般来说，孵育时间需要充分考虑抗体的特异性、亲和力和反应动力学等因素。一般来说，初始的孵育时间可以设置为1-2小时，然后根据实验结果来进行调整。为了延长抗体的使用寿命，建议将抗体保存在-20℃以下，并避免反复冻融。在使用抗体时，建议分装为小份，避免多次开封，同时在使用前先彻底混匀，以确保抗体的均一性。每次使用抗体前，需要进行充分的质量控制，比如通过western blot或ELISA等方法来检测抗体的特异性和亲和力等参数。抗体可以重复使用多次，具体次数取决于抗体的使用和保存条件，以及使用后的质量控制结果。如果抗体质量有变化或者使用次数过多，建议更换新的抗体。一抗一般怎么配制？使用什么稀释？一抗稀释液是由什么组成的，如何配制？二抗呢？一抗通常是指用于识别目标蛋白的主抗体，其浓度和稀释倍数的选择需根据实验需求和抗体性能进行优化。一般情况下，建议先在文献或厂家手册中查看推荐的稀释倍数，然后在此基础上进行优化。一抗的稀释液通常是由缓冲液和一定比例的蛋白质（如BSA或牛血清）组成。其目的是防止非特异性结合，减少假阳性信号的出现。一般来说，1%的BSA或5%的牛血清可以作为一抗稀释液的组成成分。二抗通常是指用于与一抗结合的次级抗体，用于检测一抗与目标蛋白的特异性结合。其浓度和稀释倍数的选择也需要根据实验需求和抗体性能进行优化。同样建议先查看文献或厂家手册中的推荐稀释倍数，然后进行优化。二抗的稀释液中也含有蛋白质，以防止非特异性结合。其具体组成成分会根据不同的实验和抗体类型有所不同。通常含有的成分包括缓冲液、蛋白质、抗体稀释液和防腐剂等。例如，用于WB实验的二抗稀释液通常包含1-5%的牛血清白蛋白、0.1-0.5%的Tween 20或Trition X-100、0.01-0.05 M的缓冲液、0.01-0.1%的NaN3等。需要注意的是，一抗和二抗的配制浓度和稀释倍数需要根据实验具体情况进行优化，不同抗体和不同实验要求的优化条件也有所不同。抗体在使用时应避免反复冻融和长期存放，以免影响其性能。防腐剂该如何选择？防腐剂是一种能够抑制微生物生长和繁殖的化学物质，可以在实验室中保护样本不受细菌和真菌的污染。不同类型的实验和不同类型的样本可能需要不同的防腐剂。以下是一些常用的防腐剂及其特点：EDTA：EDTA可以螯合金属离子，从而防止微生物的生长和繁殖。它通常用于细胞培养液和缓冲液中，用于保护细胞和分子不受污染和降解。NaN3：NaN3是一种常用的防腐剂，可以防止细菌和真菌的生长。它常用于保存血液样品、细胞和组织样品。硼酸：硼酸可以防止微生物的生长和繁殖，并且对于DNA和RNA的降解也有保护作用。它通常用于分子生物学实验中，如PCR反应和RNA提取。青霉素和链霉素：青霉素和链霉素是广谱抗生素，可用于预防细菌和真菌的污染。它们通常用于培养细胞和微生物的培养基中。抗菌素/抗真菌剂混合物：这些混合物通常包含青霉素、链霉素、氨苄西林、庆大霉素、甲硝唑等多种药物，可以预防不同种类的微生物的污染。选择防腐剂时，应该注意不同防腐剂的特点，以及它们对目标样本的影响，尽量选择对目标样本影响小的防腐剂。同时，在使用防腐剂时，应该按照指定的浓度加入，并且注意防腐剂的保存方法和使用时间，避免防腐剂变质或失效导致样本受到污染。选择防腐剂需要根据实验样品的性质和需要防止的微生物种类来确定。常用的防腐剂有以下几种：1.苯甲酸（sodium benzoate）：常用于pH值在4-6之间的溶液，可以抑制酵母菌、霉菌和细菌的生长，但不适用于高pH值溶液。2.苯甲酰胺（benzamide）：可以抑制酵母菌和霉菌的生长，但对细菌的抑制作用较弱。3.EDTA：可螯合金属离子，抑制微生物的生长和代谢。4.甲酚（cresol）：对多种微生物都有抑制作用，但使用过量会影响实验结果。5.过氧化氢（hydrogen peroxide）：可以杀死多种微生物，但对细胞也有一定的毒性作用，需谨慎使用。6.甲醛（formaldehyde）：可使细胞失去活力，抑制微生物生长。在选择防腐剂时，还需要考虑其对实验样品的影响，避免干扰实验结果。防腐剂的浓度应根据实验要求和防腐剂的使用说明进行选择，一般常用浓度为0.01%-0.1%。此外，防腐剂的稳定性也需考虑，应保存在阴凉、干燥的地方，避免阳光直射和高温。WB的显色剂该如何选择？Western blot（简称WB）的显色剂通常是由底物、酶和辅助剂等组成的混合物，可以通过化学反应来使蛋白质表达的目标蛋白在膜上被可视化。常见的显色剂包括ECL（增强型化学发光）和HRP（辣根过氧化物酶）等。ECL是一种较为常用的显色剂，其优点是信号灵敏度高、稳定性好，但成本相对较高。一般需要将两种溶液混合使用，其中一种溶液含有发光底物，另一种溶液含有氧化剂和辅助剂，两者混合后通过酶促化学反应发出发光信号。常见的商业ECL试剂盒有Thermo Fisher Scientific公司的Pierce ECL Western Blotting Substrate和Bio-Rad公司的Clarity Western ECL Substrate等。HRP是另一种常用的显色剂，其优点是成本相对较低，但信号灵敏度略低于ECL。HRP显色的原理是通过将HRP标记的二抗与蛋白质结合，然后用含有酶底物的溶液进行显色，HRP与底物反应产生的色素会在膜上产生可见的色带。常见的商业HRP试剂盒有Cell Signaling Technology公司的SignalFire ECL Reagent和Bio-Rad公司的Clarity Western ECL Substrate等。在选择显色剂时，需要根据实验需要进行选择。如果需要较高的灵敏度和稳定性，则可选择ECL试剂盒，如果对成本要求较高，则可选择HRP试剂盒。同时，不同的显色剂有不同的适用条件，需要根据实验操作手册进行选择和操作。如果实验室比较穷的话，该如何配制ECL（增强型化学发光）？ECL是常用于Western blot检测的显色底物之一，其配制方法如下：配制亮氨酸缓冲液（Luminol Buffer）1M Tris-HCl（pH 8.5），10mL0.5M Luminol，20mg0.1M 4-氯酚酸钠，20mg去离子水，10mL将上述物质溶解于去离子水中，混合均匀，可得亮氨酸缓冲液。配制过氧化氢缓冲液（Peroxide Buffer）1M Tris-HCl（pH 8.5），10mL10mM 过氧化氢（30%），10μL将上述物质溶解于去离子水中，混合均匀，可得过氧化氢缓冲液。将以上两个缓冲液混合使用即可，建议在使用前现配现用，以避免发生不必要的化学反应。如果实验室比较穷，也可以选择购买商用ECL显色剂盒，这样更为方便和准确。如果实验室比较穷的话，如何配制HRP（辣根过氧化物酶）液？HRP（辣根过氧化物酶）液是常用于免疫印迹（Western blot）中的一种标记物，通常需要配制成一定浓度的溶液。如果实验室比较穷，可以考虑自己配制HRP液，具体步骤如下：材料：HRP粉末磷酸盐缓冲液（PBS或TBS）甘露醇或甘油非离子表面活性剂（如Tween-20）步骤：称取适量的HRP粉末，加入适量的磷酸盐缓冲液中，并充分混合。加入适量的甘露醇或甘油，并充分混合。加入适量的非离子表面活性剂，如Tween-20，并充分混合。将溶液过滤以去除杂质，如有需要可进行多次过滤。将HRP液保存在4°C下，避免阳光直射。需要注意的是，HRP液的配制浓度应根据具体实验要求进行调整。一般来说，HRP液的最终浓度在0.05-1mg/mL之间，具体浓度可以根据实验需要进行优化。同时，HRP液的稀释和使用应避免接触金属离子和氧气，以免对HRP活性造成影响。这几种材料的详细配比？HRP液的配制涉及到辣根过氧化物酶（HRP）和HRP稀释缓冲液。HRP液的配制方法如下：辣根过氧化物酶（HRP）的配制：将HRP粉末称取适量（通常为1-10mg），加入1ml冷的去离子水中，并缓慢搅拌溶解。注意：不要在含有钢铁离子的容器中制备HRP溶液，因为这些离子会降解HRP的活性。HRP稀释缓冲液的配制：常用的HRP稀释缓冲液配方是1% BSA、0.1% Tween-20 和PBS缓冲液（含10 mM NaN3），配制方法如下：加入1g牛血清白蛋白（BSA）和100μL Tween-20到100mL PBS缓冲液中，溶解混匀。加入NaN3到最终浓度为0.01%，即加入10mg NaN3到100mL缓冲液中。HRP液的配制：将HRP溶液（一般为1-10mg/mL）按照所需浓度加入到HRP稀释缓冲液中，制备成HRP液。根据需要，HRP液可以被冻存以供以后使用。如果实验室比较穷的话，成像仪或相机拍摄转移膜，该如何搭建这样的系统？如果实验室比较穷，可以选择一些经济实惠的设备和方法来搭建转移膜成像系统。以下是一些建议：选择廉价的成像仪或相机：可以选择低成本的数码相机或手机相机，但需要注意的是，相机需要能够对焦并具有足够的像素数，以便清晰拍摄转移膜上的蛋白条带。搭建一个简单的转移膜成像系统：可以使用一个白色的背景板（比如纸板），将转移膜放置在上面，然后使用一台手持的UV灯或红外线灯照射膜表面，从而能够看到蛋白条带的位置。使用免费的图像处理软件：可以使用免费的图像处理软件（如ImageJ、GIMP等）来分析和处理图像。这些软件可以测量蛋白条带的强度和大小，以及计算相对蛋白质含量。请注意，使用廉价的设备和方法可能会影响成像的精度和可靠性。为了获得更准确的结果，建议尽可能选择高质量的设备和试剂，并严格遵循标准的实验流程。足够的像素数需要多少呢？足够的像素数取决于需要拍摄的蛋白质带的大小和数量。一般来说，对于较小的蛋白质带和较少的样品，像素数在1-2百万之间可能已经足够。但是对于大分子蛋白质和多样品的情况，可能需要更高像素数的相机。另外，需要注意的是像素数越高，相机价格也会越高。因此，在选择相机时需要根据实验需求和实验室预算进行权衡。如何使用ImageJ分析蛋白呢？写出详细的步骤以下是使用ImageJ分析蛋白的详细步骤：打开ImageJ软件，导入要分析的图像（例如Western blot图像）。点击“Re-size”菜单下的“Set Scale”命令，设置比例尺。在弹出的对话框中，输入像素的物理长度（通常为1厘米）和实际长度（例如10毫米），然后点击“OK”按钮。打开“Rectangle”或“Oval”工具，在图像中选择感兴趣的区域，包括要分析的蛋白带和邻近的背景区域。选择区域后，按住“Ctrl”键和“M”键，将其复制到新的窗口中。打开“Gels”菜单，选择“Gel Analyzer”命令。在弹出的对话框中，选择“Rectangular Selection”或“Oval Selection”作为选择区域的类型，然后点击“Analyze”按钮。在“Gel Analyzer”窗口中，可以看到各种测量结果，例如区域的大小、平均灰度值、最大灰度值、最小灰度值等等。可以根据需要选择要导出的数据类型，然后点击“Results”按钮将结果导出为文本文件。重复上述步骤，分别分析所有要分析的蛋白带和邻近的背景区域。可以使用“Multi Measure”命令在同一张图像上分析多个区域。计算相对强度：将蛋白带的平均灰度值减去背景的平均灰度值，得到相对强度值。可以使用公式计算：相对强度 = 蛋白带的平均灰度值 - 背景的平均灰度值。如果需要，可以使用“Plot Profile”命令绘制蛋白带的灰度曲线，以检查分析结果的准确性。以上就是使用ImageJ分析蛋白的详细步骤。一抗和二抗孵育之后需要清洗吗？是的，一抗和二抗孵育之后都需要清洗以去除未结合的抗体。未去除的抗体会干扰显色剂的反应，影响Western blot的结果。以下是常见的清洗步骤：用TBST缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.5，150 mM NaCl，0.05% Tween 20）洗膜3次，每次5分钟，用摇床轻轻摇动。把膜放入洗膜缓冲液（例如PBS或TBST）中，用摇床轻轻摇动，使残留的抗体彻底被洗掉。在最后一次洗膜前，将TBST缓冲液中添加0.1%的Tween 20，以去除非特异性结合的抗体和蛋白质。最后用TBST缓冲液洗膜2-3次，每次5分钟，以彻底清除残余的洗膜缓冲液。在清洗时一定要注意洗涤液的温度和浓度，以避免对蛋白质的影响。同时，也要注意不要将膜从膜夹中取出，以免对膜造成损伤。转膜之后需要清洗吗？转膜之后一般需要进行清洗，以去除可能残留在转膜上的非特异性结合的抗体、底物和其他污染物。清洗的目的是避免这些污染物影响下一步的实验结果。清洗的方法一般有以下几种：用 TBST 缓冲液洗涤：将转膜放入含有 0.1% 的 Tween-20 的 TBST 缓冲液中轻轻摇晃或搅拌，可以重复 3 到 4 次。最后用纯水或去离子水洗涤 1 次，避免 Tween-20 的残留。用PBS 缓冲液洗涤：将转膜放入含有 0.05% 的 Tween-20 的 PBS 缓冲液中轻轻摇晃或搅拌，可以重复 3 到 4 次。最后用纯水或去离子水洗涤 1 次，避免 Tween-20 的残留。用酸性甲醇洗涤：将转膜放入含有 0.1% 酸性甲醇的水中轻轻摇晃或搅拌，可以重复 2 到 3 次。最后用纯水或去离子水洗涤 1 次。以上清洗方法都需要注意操作的温和和时间的控制，以避免对转膜或蛋白质样品的损伤和破坏。蛋白转移到膜上之后，在封闭膜之前还需要清洗吗？通常在蛋白质转移完成后，需要进行转膜膜的清洗步骤，以去除可能残留在膜上的残余蛋白、离子或其他化学物质，以确保后续的检测结果准确可靠。常用的清洗缓冲液包括 TBST 缓冲液（含有 Tris-HCl、NaCl、Tween-20）、PBS 缓冲液等，其中 TBST 缓冲液是最常用的清洗缓冲液之一。清洗的步骤通常包括：在转膜膜上加入适量的清洗缓冲液，摇晃轻轻洗涤 2-3 次，每次 5-10 分钟。清洗缓冲液的用量通常为转膜膜面积的 3-5 倍。洗涤完毕后，可以用纸巾轻轻吸干膜上的液体，然后开始进行封闭步骤。需要注意的是，不要让转膜膜在干燥的情况下暴露在空气中，以免影响后续的实验结果。封闭膜之后，还需要洗掉脱脂乳或者BSA吗？通常情况下，封闭膜后需要将多余的脱脂乳或BSA洗掉，以免影响下一步的一抗和二抗结合。具体操作可以参考以下步骤：用洗涤缓冲液（如TBST）洗膜：加入足量的洗涤缓冲液，轻轻摇晃培养皿，让缓冲液均匀地覆盖在膜表面，将膜上的脱脂乳或BSA洗掉。可以重复洗涤几次，每次洗涤时间一般为5-10分钟。去除洗涤缓冲液：将洗涤缓冲液倒出或吸去，可以用吸球或吸管吸去缓冲液。加入一抗：将一抗稀释液加入培养皿中，与膜接触，进行孵育。在实际操作中，是否需要洗膜和洗的次数等因实验条件和要求而异，可以根据需要进行调整。孵育一抗，二抗的转速有什么要求吗，清洗的转速该如何设置？孵育一抗和二抗的转速一般没有特别的要求，常见的转速为100-200 rpm，主要是为了保证抗体均匀地覆盖在膜上。在清洗步骤中，也没有特别的要求，常见的清洗转速也是100-200 rpm，以充分清洗和去除多余的抗体和缓冲液为主。转速过高可能会导致膜移动或者搅动溶液，不利于清洗和孵育。一般情况下孵育一抗、二抗和洗膜的转速为20 rpm，这个速度可以使液体充分覆盖转移膜表面，促进抗体和蛋白质的结合。在洗膜步骤中，使用较高的转速（一般为80 rpm）有助于充分清清除转移膜表面的非特异性结合物质，提高检测的特异性和敏感性。因此，在洗膜步骤中使用较高的转速可以更彻底地清洗掉非特异性结合物质，一般使用80 rpm的转速比较常见。如何配制电泳胶？电泳胶通常是由聚丙烯酰胺和交联剂组成的，具体的配方可以根据需要进行调整。以下是一种简单的配制电泳胶的方法：准备聚丙烯酰胺粉末和交联剂。一般情况下，聚丙烯酰胺的浓度为10%（w/v），交联剂的浓度为2%（w/v）。在电泳槽中加入足够的冷却循环水，使其淹没电泳槽底部约1 cm。将电泳胶粉末加入水中，搅拌至完全溶解。加入足够的交联剂，搅拌均匀。转移电泳胶溶液至电泳槽中，加上电极，使电泳胶表面光滑。让电泳胶固化，这个过程通常需要30分钟至1小时。固化后，用足够的电泳缓冲液淹没电泳胶表面，以防止电泳胶干燥。注意：在制备电泳胶的过程中，要保持清洁和无菌，避免污染。同时，也要注意化学品的安全操作，避免接触皮肤和吸入气体。如何根据蛋白的大小，选择合适的电泳胶的大小？选择合适的电泳胶大小通常取决于目标蛋白的大小和电泳装置的大小。下面是一些常见的选择方法：了解目标蛋白的大致分子量，选择合适的电泳胶孔径。通常，孔径越大，适用于分离的蛋白质分子量就越大。例如，对于10-200 kDa的蛋白质，10%-15%的SDS-PAGE胶通常是一个不错的选择。确定电泳装置的大小。在选择电泳胶的大小时，需要考虑电泳槽的大小，以确保胶可以适合电泳槽，并且足够大以容纳要分离的样品量。根据实验需要选择。如果需要分离多个分子量较接近的蛋白质，则可以选择梯度胶，如5%-20%的梯度胶，以获得更好的分离效果。如果需要分离具有相似分子量的蛋白，则可以选择单一百分比的胶。总的来说，选择电泳胶的大小需要综合考虑目标蛋白的大小、电泳装置的大小以及实验需要等多个因素，以获得最佳的分离效果。该如何根据蛋白质的大小选择合适百分比的电泳胶？选择合适的电泳胶百分比可以使蛋白质得到更好的分离和可视化。下面是一些根据蛋白质大小选择电泳胶百分比的常规建议：对于较小的蛋白质（100 kDa），建议使用8%-10%的聚丙烯酰胺凝胶，因为这样的凝胶能够容纳较大的蛋白质，并提供更好的分离效果。需要注意的是，这只是一个基本的指导，实际上应该根据具体的实验条件和样品类型来选择最佳的电泳胶百分比。另外，不同品牌的电泳胶可能具有不同的分离性能，因此应该在实验室内根据实际情况进行测试和优化。分离胶和浓缩胶区别是什么？分离胶和浓缩胶是两种不同的电泳胶。分离胶一般用于蛋白质的分离，是一种相对稀疏的胶，可以分离较大分子量的蛋白质。常用的分离胶百分比包括8%、10%、12%、15%等。而浓缩胶则是一种相对浓密的胶，用于浓缩蛋白质或分离较小分子量的蛋白质。浓缩胶的百分比一般较高，如20%、25%等。所以，根据蛋白质的分子量大小，可以选择合适的电泳胶，以实现蛋白质的分离和浓缩。一般实验室的电泳胶的长度是83mm，高度是73mm，厚度是1.5mm，如何确定浓缩胶的高度呢，使得蛋白浓缩效果最好？确定浓缩胶的高度需要考虑蛋白的分子量和所需的浓缩倍数。通常情况下，浓缩胶的高度可以选择为分离胶高度的一半或者1/3左右。浓缩胶高度为分离胶高度的一半时，可以在电泳过程中将蛋白聚集在较小的区域，方便后续的取样和转移。同时，这种高度的浓缩胶可以在不影响蛋白分离的情况下，有效地将蛋白浓缩。如果需要更高的浓缩倍数，可以选择更薄的浓缩胶。例如，浓缩胶高度为分离胶高度的1/3，可以获得更高的浓缩倍数，但可能会影响蛋白分离效果。因此，选择浓缩胶高度时，需要根据具体实验需求和所用电泳系统的参数进行综合考虑，进行优化选择。在WB中如何选择是恒压还是恒流或者恒功率？在WB中，通常建议使用恒流模式进行电泳操作，因为在恒流模式下，电泳电流保持稳定，可以控制样品的迁移速度和分离效果，且样品分离的时间更加稳定。同时，使用恒流模式可以避免电泳中电压波动对电流的影响，减少样品迁移速度的变化，使得结果更加准确可靠。对于蛋白质的转移步骤，一般建议使用恒压模式进行电转印，因为恒压模式下，可以保证转移电流稳定，同时也可以使得蛋白质均匀地转移到膜上。在恒压模式下，电流会随着时间而变化，但是在实验室通常设定一个合适的电压来保持恒定的电流，使得蛋白质能够均匀地转移到膜上。对于电源设备的选择，一般建议使用具备恒流和恒压模式的电源设备，可以根据实验需求选择合适的模式进行操作。而恒功率模式一般在电泳操作时并不常用。实验室为什么都是使用恒压来电泳呢？使用恒压电泳的主要原因是因为它更加简便易行，而且不需要太多的设备或仪器。此外，如果样品浓度相对较低，使用恒流电泳可能需要更长的运行时间来达到理想的分离效果，从而可能导致样品的损失和稀释。另外，恒流电泳需要使用更昂贵的设备和试剂，这也会增加实验成本。因此，在实验室中，恒压电泳是最常用的电泳方式之一。如果想达到最佳的浓缩效果的话，该如何设置电压呢？是大还是小？电压的大小对浓缩效果有影响，但是影响并不是单一的。一般来说，过高的电压会导致样品在聚丙烯酰胺凝胶中快速迁移，使得蛋白质分离不充分，从而影响浓缩效果和分离结果。过低的电压则可能导致电泳时间过长，使得蛋白质沉积在样品孔旁而无法进入凝胶中，同样会影响浓缩效果和分离结果。因此，为了达到最佳的浓缩效果，电压需要根据实验室的具体情况进行调整。一般建议以较低的电压（例如100V-120V）进行电泳，以保证充分的分离和浓缩效果。如果需要缩短电泳时间，可以适当提高电压，但应根据样品大小和凝胶类型进行调整。此外，也需要注意实验室电源和电泳设备的稳定性和准确性，以避免影响结果的偏差。如果根据蛋白大小设置电压来跑电泳的话，该如何设置？根据蛋白质的大小来设置电压可以提高电泳的分离效果和保护样品不受过度电泳损伤。一般来说，大分子量蛋白质需要较低的电压，而小分子量蛋白质需要较高的电压。具体的电压设置可以通过以下公式计算得出：V = 2.3 × L / S其中，V代表电压，L代表电泳胶的长度，S代表目标蛋白的分子量。根据公式可以看出，电压与电泳胶的长度成正比，与蛋白质的分子量成反比。以一个标准的电泳胶长度（例如10 cm）为例，假设要分离的蛋白质分子量为50 kDa，则可以根据公式计算出电压大约为115 V。而如果要分离的蛋白质分子量为150 kDa，则电压可以设置为约38 V。需要注意的是，电压过高可能会导致样品过度电泳，损伤蛋白质，而电压过低则会导致电泳时间过长，分离效果变差。因此，在实验中需要进行实际操作时，需要根据具体实验条件和目标蛋白质的性质进行调整。如何将蛋白marker中的不同大小的蛋白在电泳胶充分分离开？该如何设置电压？要将蛋白Marker中的不同大小蛋白在电泳胶中充分分离开，需要根据蛋白的大小选择合适的电泳胶百分比和电泳条件。通常来说，选择较低的百分比电泳胶可以使较大的蛋白分离得更好，而选择较高的百分比电泳胶可以使较小的蛋白分离得更好。例如，如果使用10-250 kDa的蛋白Marker，可以选择8-12%的聚丙烯酰胺凝胶电泳胶。在电泳前，先预运行电泳胶，以去除任何可能污染电泳胶的物质。然后将样品加载到电泳胶中，通常使用约100 V的电压持续电泳30-60分钟，直到蛋白Marker中的各个蛋白条带完全分离开。在电泳过程中，可以在必要时逐渐增加电压，以保证蛋白质分离得更好。最后，取出电泳胶进行进一步的分析，如蛋白质染色或Western blotting等如何将最小的蛋白marker也能跑出来，且与溴酚蓝分开？为了能够将最小的蛋白标记物分离开并与溴酚蓝分开，可以采用以下方法：选择适当的电泳缓冲液和电泳胶：使用含有高浓度小分子淀粉的电泳缓冲液和电泳胶，这样可以增加电泳胶的网孔大小，从而使得小分子蛋白能够更容易地通过电泳胶。增加电压：可以适当增加电压，但要避免产生过多的热量，以免对蛋白质的结构和活性产生影响。延长电泳时间：将电泳时间延长可以让小分子蛋白有足够的时间通过电泳胶。使用合适的蛋白标记物：选择适当的蛋白标记物，包括小分子蛋白，这样可以在电泳胶中产生更好的分离效果。需要注意的是，在进行电泳实验之前，需要仔细调整电泳条件，包括电泳缓冲液、电泳胶的浓度、电压和电泳时间等，以确保最佳的分离效果和样品保护。如何电泳使得蛋白marker的分辨率比较高？要提高蛋白质标记物的分辨率，可以考虑以下几点：选择合适的电泳胶和电泳缓冲液：根据蛋白质大小选择合适的电泳胶浓度和孔径，以及适当的电泳缓冲液。电泳时间：电泳时间越长，蛋白质分离越充分。但是过长的电泳时间会导致蛋白质的降解和失活。电泳电压：电泳电压越高，电泳时间越短，但是也容易导致蛋白质热变性和迁移速度过快而失去分辨力。因此，一般来说，电泳电压需要根据电泳胶浓度、缓冲液体系和蛋白质大小进行优化。电泳温度：提高电泳温度可以加快电泳速度和增强分离效果，但是过高的温度也会引起蛋白质热变性和失活。因此，一般来说，电泳温度不宜超过室温。蛋白标记物的浓度：一般来说，标记物的浓度越高，分离效果越好。但是过高的浓度会导致过多的样品堆积在起点处，降低分辨率。因此，需要根据标记物的浓度和样品量进行优化。电泳前处理：在电泳前，可以对样品进行预处理，如加入还原剂、煮沸或冷冻等，以增强蛋白质分离效果。综合考虑上述因素，可以根据具体实验情况优化电泳条件，以提高蛋白质标记物的分辨率。使用黄枪头200μl加样比较好还是白枪头20μl比较好？使用哪种枪头进行样品加载，主要取决于样品的体积和浓度以及电泳胶槽的大小和类型。一般来说，对于体积较小的样品和需要高精度的定量分析，使用白色200μl的枪头可以更准确地加样，而对于体积较大的样品或者需要加速实验的情况，使用黄色200μl的枪头可以更快速地完成样品的加载。需要注意的是，不同厂家生产的枪头可能存在一定的差异，具体使用时需要参考厂家提供的建议或经验，或者进行实验优化来选择最合适的加样方式。常用的实验室的WB胶板是多少孔的？常用的实验室的Western blot胶板有两种常见的尺寸：10 x 10 cm和8.6 x 13.5 cm。其中10 x 10 cm的胶板通常有10-12个小孔，每个小孔的直径一般为0.8-1.0 cm左右；而8.6 x 13.5 cm的胶板通常有4-6个大孔，每个大孔的直径一般为2.0-2.5 cm左右。根据实验需要，可以选择合适的胶板尺寸和孔数。伯乐的胶板伯乐胶板是指Bio-Rad公司出品的Mini-PROTEAN TGX预铸凝胶，其孔数和大小因不同型号而异。一般来说，Mini-PROTEAN TGX gel的孔数从8到18不等，可以根据需要选择不同的型号。常用的Mini-PROTEAN TGX gel有10孔、12孔、15孔、4-15%梯度凝胶和4-20%梯度凝胶等型号。其中，10孔和15孔的胶板比较常见。不同的型号适用于不同的实验目的和样品大小。例如，对于较小的蛋白质，可以使用孔数较多的胶板以提高分辨率。而对于较大的蛋白质，可以使用孔数较少的胶板以提高负载量。这两种常见伯乐的10孔和15孔的胶板，使用哪种枪头加样比较好？一般来说，使用黄色的200 μL枪头加样比较方便。这种枪头可以容纳更多的样品，并且能够快速地将样品均匀地添加到凝胶孔中。相比之下，20 μL的白色枪头虽然可以加样更准确，但操作相对比较繁琐，且需要多次添加样品到每个凝胶孔中。这两种常见伯乐的10孔和15孔的胶板，一般能加多少样品？10孔和15孔的胶板都是单向电泳，样品槽宽度一般为1.5mm左右，长度为约3-3.5cm左右，可以加入的样品量视样品的大小和所用的样品枪头大小而定。通常情况下，使用20μl或者200μl的枪头加样，每孔可加入10-20μl的样品，如果使用更小的枪头，加样量可以更少。蛋白样品该如何储存？蛋白样品的储存方式应根据具体的样品性质和需求来选择，以下是一些常见的储存方法：冷冻保存：将样品冷冻在-80℃或更低的温度下，可以有效地保护蛋白质的完整性。在冷冻前可以添加一些保护剂，如甘油、蔗糖、牛血清白蛋白等，以保护蛋白质的稳定性。液氮保存：对于需要长期保存的样品，可以将其置于液氮中保存，可保存数年甚至更久。冷藏保存：对于一些较为稳定的蛋白质样品，可以在4℃的冰箱中保存。但是，冷藏保存时间不能太长，一般不超过一周。干燥保存：一些易于干燥的蛋白质，如酶类，可以在低温下（-20℃）干燥保存。干燥后将其密封保存，可延长样品的保质期。无论使用何种储存方式，都应注意以下事项：样品应该在储存前彻底冷却，以避免热分解。样品应该储存在干燥、清洁、无菌的容器中，以避免受到污染。样品应该避免长时间的震动，以避免样品降解。样品应该在标签上注明名称、浓度、储存温度等信息，以方便管理和使用WB的蛋白样品该如何储存？WB的蛋白样品通常应该在-80℃冰箱中保存，最好在冰箱中制备一定量的储备样品，避免反复冻融。在制备储备样品时，可以使用小体积的离心管将蛋白样品分装储存，避免重复冻融导致蛋白质降解。此外，蛋白样品的储存容器和工具应该保持干燥和清洁，避免细菌或其他污染物的污染，同时应避免样品长时间暴露在室温下或受到光照。在需要用到蛋白样品时，应及时从冰箱中取出，放到冰上化融，避免直接放到室温下化融。在4℃能放多久？在-20℃能放多久？在4℃下，蛋白样品可以储存数天至数周不等，具体时间取决于样品的稳定性和储存条件。在-20℃下，蛋白样品可以储存数月至数年不等，具体时间也取决于样品的稳定性和储存条件。一般来说，对于一些易于降解或易氧化的蛋白质，建议在-80℃下冻存，以确保其长期保存的稳定性。需要注意的是，不同的蛋白样品储存时间和条件可能有所不同，最好在储存之前查阅相关文献或参考产品说明书。已经预变性，煮过加了5×SDS之后的WB的蛋白样品该如何储存？在4℃能放多久？在-20℃能放多久？-80℃冰箱中可以放多久？已经预变性、煮过且加了5×SDS的WB蛋白样品可以在室温下或4℃的冰箱中储存短期（数天）以进行下一步实验。如果需要长期储存，最好将样品冻存，可以在-20℃或更低温度（如-80℃）下保存。储存在-20℃的条件下，蛋白质样品可以保持几个月至半年左右，但是具体时间还要看样品的性质和储存条件等因素。在-80℃冰箱中储存时间更长，可以长达数年至十年不等，但是也要注意不同蛋白样品的储存时间可能会有差异。需要注意的是，多次冻融会降低蛋白质的稳定性，因此在分装样品时可以考虑将大量的样品分成小分装保存。4℃的冰箱中储存短期（数天）以进行下一步实验，为什么只有几天？即使是在4℃储存，蛋白样品也会在一定时间内逐渐降解。在4℃下，蛋白质通常可储存几天到一周左右，因此建议在适当的时间内尽快进行下一步实验。如果需要长期储存，最好将样品冷冻在-20℃或更低温度下，或使用加入保护剂的方式进行储存。蛋白marker可以在4℃放多久？蛋白Marker可以在4℃冰箱中长期保存，通常可以保存数月到一年不等，具体保存时间取决于生产厂家的说明和实验室的储存条件。建议在使用前检查蛋白Marker的有效期，并在使用后及时将其保存到适当的温度下，以确保其质量和稳定性。为什么蛋白marker可以在4℃储存很久而蛋白样品不行？蛋白标记物一般是稳定的、纯净的蛋白质混合物，通常是由多种已知大小的蛋白质组成。相比之下，蛋白样品通常是未经纯化的混合物，其中含有许多其他蛋白质和生物分子，这些物质可能影响蛋白样品的稳定性和降解。因此，蛋白标记物可以在4℃下长期储存而不受太多影响，而蛋白样品在4℃下储存的时间相对较短，需要在较短时间内处理和使用。不是已经变性了吗即使是已经变性的蛋白质，也可能因为降解或氧化等因素而失去其完整性和稳定性。此外，蛋白质样品中可能存在多种蛋白质、酶、脂质等组分，这些组分之间可能相互作用并导致降解或不可逆的变性。因此，建议在短时间内进行下一步实验。而蛋白marker通常是高纯度、单一的蛋白质标准品，相对比较稳定，可以长期保存在适当的条件下。电泳的条带是弯的是怎么回事呢？电泳条带弯曲通常是由于以下几个原因之一或几个原因的组合造成的：样品加载不均匀或分布不均匀。如果样品在电泳胶中分布不均匀，那么可能会在运行过程中出现条带弯曲。这可能是由于样品的沉积或样品加载不均匀所引起的。电泳胶的制备问题。如果电泳胶的制备不当，如聚合物的浓度不正确、pH 值不稳定或凝胶的老化等，也会导致电泳条带出现弯曲。电泳条件设置不当。如果电泳条件设置不正确，如电流过高、电压过低、电泳时间过长等，都可能导致电泳条带的弯曲。设备问题。如果电泳设备存在问题，如电源不稳定或导电板不均匀等，也会导致电泳条带的弯曲。因此，为了避免电泳条带的弯曲，需要确保样品加载均匀，制备高质量的电泳胶，正确设置电泳条件，并检查电泳设备是否正常工作。marker跑的有点糊是怎么回事？如果marker在电泳胶中跑的有点糊，有以下几个可能的原因：电泳胶浓度过高：如果电泳胶的浓度太高，会导致样品和marker的运移速度变慢，甚至可能在一定程度上限制marker的分辨率。建议检查电泳胶浓度是否正确。电压过高：如果电压设置过高，可能会导致电泳胶温度过高，从而导致marker跑得不够清晰，建议减小电压或减少电泳时间。加样不均匀：如果样品和marker的加样不均匀，会导致marker跑得不够清晰，建议在加样前充分混匀样品和marker，并在同一位置进行加样。电泳胶老化：如果电泳胶老化，可能会影响marker的运移和分辨率。建议定期更换电泳胶。蛋白质样品的质量问题：如果蛋白质样品的质量问题，如降解、污染等，也可能会影响marker的分辨率。建议检查样品质量，并采取相应的处理措施。总之，如果marker跑得有点糊，建议检查以上几个方面，并根据具体情况进行调整。如果电泳液用的比较久会导致什么情况发生？如果电泳液用的比较久，可能会导致以下情况发生：pH 值变化：电泳缓冲液中的 pH 值对电泳结果有很大的影响，使用时间过长会导致 pH 值变化，影响电泳结果的稳定性和准确性。缓冲能力下降：电泳缓冲液的缓冲能力会随着使用时间的延长而下降，导致电泳结果不稳定，甚至影响电泳的分离效果。离子浓度变化：电泳缓冲液中的离子浓度也会随着使用时间的延长而发生变化，如果离子浓度变化过大，会导致电泳结果出现偏移或者不准确。氧化还原能力下降：电泳缓冲液中一些重要的成分，如 DTT（二硫苏糖醇）和β-巯基乙醇等，具有还原作用，用久了会降低其还原能力，影响电泳结果。因此，为了保证电泳结果的稳定性和准确性，建议经常更换新的电泳缓冲液，尤其是在进行重要实验时更应该使用新鲜的缓冲液。为什么显影的时候，同一张膜有的部分是干净的，有的部分是脏的？如果marker在电泳胶中跑的有点糊，有以下几个可能的原因：电泳胶浓度过高：如果电泳胶的浓度太高，会导致样品和marker的运移速度变慢，甚至可能在一定程度上限制marker的分辨率。建议检查电泳胶浓度是否正确。电压过高：如果电压设置过高，可能会导致电泳胶温度过高，从而导致marker跑得不够清晰，建议减小电压或减少电泳时间。加样不均匀：如果样品和marker的加样不均匀，会导致marker跑得不够清晰，建议在加样前充分混匀样品和marker，并在同一位置进行加样。电泳胶老化：如果电泳胶老化，可能会影响marker的运移和分辨率。建议定期更换电泳胶。蛋白质样品的质量问题：如果蛋白质样品的质量问题，如降解、污染等，也可能会影响marker的分辨率。建议检查样品质量，并采取相应的处理措施。出现这种情况可能是因为在显影的过程中，膜的不同部位与显影液的接触程度不同，或者显影液的流动不均匀所致。这可能是由于显影液在膜表面的流动不够均匀或者显影液在不同部位停留时间不同所导致的。此外，膜表面的污染或者不均匀的染料扩散也可能导致同一张膜上的某些区域出现清晰，而其他区域则比较模糊或脏。总之，如果marker跑得有点糊，建议检查以上几个方面，并根据具体情况进行调整。如果电泳液用的比较久会导致什么情况发生？如果电泳液用的比较久，可能会导致以下情况发生：pH 值变化：电泳缓冲液中的 pH 值对电泳结果有很大的影响，使用时间过长会导致 pH 值变化，影响电泳结果的稳定性和准确性。缓冲能力下降：电泳缓冲液的缓冲能力会随着使用时间的延长而下降，导致电泳结果不稳定，甚至影响电泳的分离效果。离子浓度变化：电泳缓冲液中的离子浓度也会随着使用时间的延长而发生变化，如果离子浓度变化过大，会导致电泳结果出现偏移或者不准确。氧化还原能力下降：电泳缓冲液中一些重要的成分，如 DTT（二硫苏糖醇）和β-巯基乙醇等，具有还原作用，用久了会降低其还原能力，影响电泳结果。因此，为了保证电泳结果的稳定性和准确性，建议经常更换新的电泳缓冲液，尤其是在进行重要实验时更应该使用新鲜的缓冲液。如果是胶片式的该如何配制显影液，定影液？对于胶片显影和定影，一般使用的是比较成熟的显影液和定影液配方，具体配方可以参考以下常用的配方：显影液配方：水：800ml亚硫酸钠：2g氢氟酸：20ml水杨酸：1g氯化钠：2g对甲酚磷酸：20mg溴乙酸钾：250mg氯化钙：20mg将以上物质依次加入水中，充分混合搅拌即可。定影液配方：水：800ml碘酸钾：10g碘化钾：2g碘：1g氢氧化钠：5g将以上物质依次加入水中，充分混合搅拌即可。需要注意的是，显影液和定影液都是一次性使用，不能重复使用，且配制后需要在室温下保存，不要暴露在光线下。PVDF膜和NC膜的区别是什么？裁膜时裁的膜比胶大一些，在半干转转膜时没什么安全隐患吧？PVDF膜和NC膜都是用于蛋白印迹的传输膜，它们的主要区别在于材料和性质不同。PVDF膜由聚偏氟乙烯制成，具有较好的耐化学品性能和耐高温性能，因此可以用于较严酷的条件下，如使用强酸、强碱、高温等条件下的蛋白印迹实验；而NC膜由纤维素醋酸盐制成，具有较好的电吸附性和纯度，适用于常规的蛋白印迹实验。至于裁剪膜时，一般建议裁剪的膜大小比准备的胶片略大一些，以确保充分覆盖整个胶。在转移膜时，如果转移膜没有充分粘附在胶上，可能会发生转移失败或者膜上的蛋白分布不均匀的情况，因此在转移膜之前，最好确保转移膜已经充分湿润，并且膜和胶之间的空气已经排除干净。在使用genescript的仪器进行转膜时，为什么膜会烧掉，有点发黄？能是以下原因导致的：转膜液的pH值过低或过高，影响了转膜效果。建议检查转膜液的pH值并进行调整。转膜液中的甲醇含量过高，导致膜被烧掉。建议按照指定比例配制转膜液，并将甲醇的浓度控制在合适范围内。转膜时间过长，导致膜被过度转移和破损。建议根据蛋白质大小和特性等因素来确定转膜时间，并进行适当的控制。转膜条件设置不合适，例如电流和电压设置过高，也可能导致膜烧掉。建议根据仪器和膜的使用说明书，了解合适的转膜条件，并进行适当的调整。转膜仪器本身存在问题，需要进行检修或更换。建议联系仪器供应商或维修人员进行检查和维修。使用的是乙醇，也会烧膜吗？使用乙醇进行转膜一般不会导致膜烧掉。烧膜的原因可能是在转膜过程中使用的电流过高，导致膜受热而烧掉。此外，如果使用的是旧的或者已经多次使用过的转膜仪器，也可能会导致电流不稳定而烧掉膜。建议检查仪器是否正常工作，确保使用合适的转膜电流和时间，以及及时更换陈旧的仪器和试剂。转膜的夹片是铁网格片，上面有颜色五颜六色是什么？这个会导致烧膜吗？如何将这些颜色去掉呢？转膜的夹片上的五颜六色是由于夹片的氧化层导致的。这些颜色不会导致烧膜，但如果夹片表面覆盖了太多氧化层，可能会影响转膜效果。如果想要去除夹片表面的氧化层，可以使用酸性清洗剂，如浓硫酸或氢氟酸等。需要注意的是，这些酸性清洗剂具有强腐蚀性和毒性，操作时需佩戴防护手套、护目镜等防护措施，并在通风良好的实验室内进行。在清洗完毕后，需用大量水彻底清洗干净，以防止酸性残留对实验产生干扰。这些氧化层去除之后会影响转膜夹子的寿命吗？一般来说，去除氧化层不会直接影响转膜夹子的寿命。但是，如果去除氧化层的过程中使用了过于激烈的方法，比如使用强酸或强碱等腐蚀性物质，可能会导致转膜夹子的材质受损或者表面的涂层被破坏，从而影响夹子的使用寿命。因此，在去除氧化层的过程中，应该选择适当的方法，尽量避免对夹子造成损害。转膜液该如何配制？详细的方案，比如类似genescript的产品不同厂家的转膜液配方可能略有不同，以下是一种基本的配方： 10 × Tris-Glycine缓冲液 Tris基本浓度为25 mM，pH 8.3 Glycine浓度为192 mM 可以将1M Tris (pH 8.3)和1.92 M glycine溶液混合来制备10 × Tris-Glycine缓冲液。 20%（w/v）SDS溶液 加入20克SDS到100毫升去离子水中 混合均匀，使SDS充分溶解 Methanol 蒸馏水 使用基本方法： 将Tris-Glycine缓冲液稀释至1 ×浓度（25 mM Tris，192 mM glycine），加入SDS溶液至0.1%（w/v）的最终浓度。 加入相应比例的甲醇（一般为20% v/v）。 最后加入足够的蒸馏水至所需的体积。 搅拌混合均匀。 请注意，具体的配制方法可能因厂家和产品而异，建议在使用前仔细阅读产品说明书并按照说明书操作。此外，使用时需要避免触碰眼睛和皮肤，并注意通风环境。 试剂以及耗材，中文英文简写等 蛋白样品：Protein sample 蛋白marker：Protein marker SDS：十二烷基硫酸钠，Sodium dodecyl sulfate TRIS缓冲液：Tris-HCl缓冲液，Tris-Hydrochloride buffer 十倍电泳缓冲液：10x TBE缓冲液，10x Tris-Borate-EDTA buffer 碘酒：Iodine solution 丙酮：Acetone 甲醛：Formaldehyde 非离子型洗涤剂：Tween 20 蛋白胶：Protein gel 十倍显影缓冲液：10x developing buffer 十倍停止液：10x stop solution PVDF膜：Polyvinylidene difluoride membrane NC膜：Nitrocellulose membrane 乙醇：Ethanol 转膜液：Transfer buffer 铁网格片：Iron wire mesh 活化剂（Activator） 氨基酸（Amino acid，简写为AA） 磷酸酯酶（Alkaline phosphatase，简写为AP） 碱性磷酸酶标记试剂盒（Alkaline phosphatase labeling kit，简写为AP kit） 氨基甲酸（Formic acid，简写为FA） 离心管（Centrifuge tube，简写为CT） 乙酸乙酯（Ethyl acetate，简写为EA） 乙醇（Ethanol，简写为EtOH） 葡萄糖（Glucose，简写为Glc） 高保湿剂（Humectant） 缓冲液（Buffer） 明胶（Gelatin） 去离子水（Deionized water，简写为DI water） 盐酸（Hydrochloric acid，简写为HCl） 氢氧化钾（Potassium hydroxide，简写为KOH） 洋菜胶（Agarose，简写为Agar） 丙酮酸（Pyruvic acid，简写为PA） 淀粉（Starch） 硫酸（Sulfuric acid，简写为H2SO4） 磷酸（Phosphoric acid，简写为H3PO4） 溴酚蓝（Bromophenol blue，简写为BPB） 溴酚青（Bromocresol green，简写为BCG） 溴酚红（Bromothymol blue，简写为BTB） 碘化钾（Potassium iodide，简写为KI） 碘化钠（Sodium iodide，简写为NaI） 碳酸氢钠（Sodium bicarbonate，简写为NaHCO3） 硝酸钠（Sodium nitrate，简写为NaNO3） 硫酸铵（Ammonium sulfate，简写为AS） 硫酸钠（Sodium sulfate，简写为Na2SO4） 碳酸钙（Calcium carbonate，简写为CaCO3） 硝酸银（Silver nitrate，简写为AgNO3） 硝酸（Nitric acid，简写为HNO3） 磷酸二氢钾（Potassium dihydrogen phosphate，简写为KH2PO4） 磷酸三钠（Trisodium phosphate，简写为TSP） 磷酸盐缓冲液（Phosphate buffered saline，简写为PBS） |
| CopyRight 2018-2019 实验室设备网 版权所有 |